Estudo endócrino reprodutivo e do comportamento sócio-sexual de sagui-de-tufo-preto (Callithrix penicillata) mantido em cativeiro / Reproductive endocrine and socio-sexual behavior study of black-tufted-marmoset (Callithrix penicillata) kept in captivity

A comunicação do estado reprodutivo nos primatas da família Callithrichidae, depende principalmente dos comportamentos sócio-sexuais como um sistema de sinalização primário, uma vez que nestas espécies a ovulação não é percebida pelos machos. Neste trabalho, os padrões de comportamentos sócio-sexuais foram analisados em conjunto com as concentrações de metabólitos fecais dos esteróides sexuais progesterona (MFP), estradiol (MFE) e testosterona (MFT) em casais cativos de Sagüi-de-tufos-pretos (Callithrix penicillata), nas diferentes fases do ciclo ovariano. O grupo estudado era composto por quarto casais adultos, mantidos no Centro de Reabilitação de Animais Selvagens da prefeitura de São Paulo. Os padrões comportamentais foram registrados pelo método de amostragem focal por intervalo de tempo a cada 30 segundos, cinco vezes por semana, totalizando 14.400 registros por animal. A mensuração das concentrações de metabólitos fecais dos esteroides sexuais foram realizados pelo método de enzima imunoensaio (EIE). Os resultados obtidos dessas concentrações possibilitaram a determinação endócrina das fases do ciclo ovariano (folicular e luteal) e de suas respectivas durações, assim como a determinação da fase periovulatória. Foram caracterizados 31 ciclos ovarianos completos, com duração de 24,3±4,1 dias (média ±DP), sendo que a fase folicular compreendeu 13,04±4,8dias e a fase lútea 11,2±4,2 dias. Os comportamentos sócio-sexuais (marcação por cheiro, cheirar genitália, catação e apresentação sexual) e a variável "proximidade" mostraram-se significativamente mais prevalentes na fase periovulatória do que nas demais fases do ciclo. Não houve alteração das concentrações de MFT dos machos ao longo de todo o período estudado. A análise conjunta das concentrações de metabólitos fecais de esteróides sexuais e dos comportamentos sócio-sexuais possibilitou um melhor entendimento das relações endócrino-comportamentais e reprodutivas de C. penicillata.

The communication of the female reproductive status in Callithrichidae relies mainly on the socio-sexual behavior, as generally the ovulation is concealed in this primate family by a primary signaling system. In this study the socio-sexual behavior patterns was analyzed in association with the concentration of fecal metabolites of sex steroid hormones progesterone (MFP), estradiol (MFE) and testosterone (MFT) in captive couples of Black-Tufted-Marmoset (Callithrix penicillata), during the different phases of the ovarian cycle. The studied group was composed of four adult couples kept in the São Paulo City Wild Animals Rehabilitation Center. The behavioral patterns were record by focal samplings, with 30 seconds intervals for each observation, five days a week, totalizing 14.400 registers per animal. The measurement of fecal metabolites of progesterone (MFP), estradiol (MFE) and testosterone (MFT) proceeded by enzyme immune assay (EIA). The results allowed to determine the duration of the ovarian cycle and to characterize three different phases (follicular, periovulatory and luteal). It was possible to determine 31 complete cycles that lasted 24.3±4.1 days (Mean ± SD). The follicular and luteal phases lasted 13.04±4.8 and the luteal phase 11.2±4.2 days. The behavioral patterns (scent marking, sniff genitals, grooming and sexual presentation) were more prevalent in the periovulatory phase as the behavioral variable "proximity" as well. There were no variations in the concentration of MFT in the males during the period studied. The associated analyses of the fecal metabolite of sex steroids and the socio-sexual behaviors led to a better understanding of the factors involved in the reproduction of C. penicillata.

Effects of prepubertal exposure to silver nanoparticles on reproductive parameters in adult male Wistar rats.

The incidence of male reproductive pathologies, such as hypospadias, cryptorchidism, testicular cancer, and low sperm production in adulthood, is increasing and may be related to exposure to environmental contaminants. The silver nanoparticles (AgNP) are a new class of chemical compounds commonly used in both medical and nonmedical settings, and they affect development of spermatogonial stem cells in vitro. The aim of this study was to examine the adverse productive toxic effects of AgNPs in male Wistar rats exposed during the prepubertal period and sacrificed at postnatal day (PND) 53 and PND90. Growth was assessed by daily weighing. The progress of puberty in the rats was measured by preputial separation, while spermatogenesis was assayed by (1) measuring the sperm count in testes and epididymis and (2) examining the morphology and morphometry of seminiferous epithelium using stereological analysis. In addition, testosterone and estradiol levels were assayed by radioimmunoassay. The weight of the animals at PND90 did not change markedly, but growth was less in the group treated with AgNP at 50 µg/kg from PND34 to PND53. AgNP exposure produced a delay in puberty in both treated groups. Decreased sperm reserves in the epididymis and diminished sperm transit time were observed at PND53, while a reduction in sperm production occurred at PND90. The morphology of the seminiferous epithelium was markedly altered. Data demonstrated that prepubertal exposure to AgNP altered reproductive development in prepubertal male Wistar rats, as evidenced by impairment in spermatogenesis and a lower sperm count in adulthood.

Post-partum testosterone administration partially reverses the effects of perinatal cadmium exposure on sexual behavior in rats

This study investigated the effects of perinatal cadmium exposure on sexual behavior, organ weight, and testosterone levels in adult rats. We examined whether immediate postpartum testosterone administration is able to reverse the toxic effects of the metal. Forty pregnant Wistar rats were divided into three groups: 1) control, 2) 10 mg kg-1 cadmium chloride per day, and 3) 20 mg kg-1 cadmium chloride per day. These dams were treated on gestational days 18 and 21 and from lactation 1 to 7. Immediately after birth, half of the offspring from the experimental and control groups received 50 μl (i.p.) of 0.2% testosterone. Male sexual behavior, histological analysis and weight of organs as well as serum testosterone levels were assessed. Results showed that both cadmium doses disrupted sexual behavior in male rats, and postnatal treatment with testosterone reversed the toxic effects of 10 mg kg-1 cadmium and attenuated the effects of 20 mg kg-1 cadmium. Body weight and absolute testis, epididymis, and seminal vesicle weight were decreased by the higher cadmium dose, and testosterone supplementation did not reverse these effects. Serum testosterone levels were unaffected by both cadmium doses. No histological changes were detected in all organs analyzed. Maternal cadmium exposure effects in sexual parameters of male rat offspring were explained by the altered masculinization of the hypothalamus. We suggest that cadmium damaged cerebral sexual differentiation by its actions as an endocrine disruptor and supported by the changes discretely observed from early life during sexual development to adult life, reflected by sexual behavior. Testosterone supplementation after birth reversed some crucial parameters directly related to sexual behavior.(AU)

Post-partum testosterone administration partially reverses the effects of perinatal cadmium exposure on sexual behavior in rats

This study investigated the effects of perinatal cadmium exposure on sexual behavior, organ weight, and testosterone levels in adult rats. We examined whether immediate postpartum testosterone administration is able to reverse the toxic effects of the metal. Forty pregnant Wistar rats were divided into three groups: 1) control, 2) 10 mg kg-1 cadmium chloride per day, and 3) 20 mg kg-1 cadmium chloride per day. These dams were treated on gestational days 18 and 21 and from lactation 1 to 7. Immediately after birth, half of the offspring from the experimental and control groups received 50 μl (i.p.) of 0.2% testosterone. Male sexual behavior, histological analysis and weight of organs as well as serum testosterone levels were assessed. Results showed that both cadmium doses disrupted sexual behavior in male rats, and postnatal treatment with testosterone reversed the toxic effects of 10 mg kg-1 cadmium and attenuated the effects of 20 mg kg-1 cadmium. Body weight and absolute testis, epididymis, and seminal vesicle weight were decreased by the higher cadmium dose, and testosterone supplementation did not reverse these effects. Serum testosterone levels were unaffected by both cadmium doses. No histological changes were detected in all organs analyzed. Maternal cadmium exposure effects in sexual parameters of male rat offspring were explained by the altered masculinization of the hypothalamus. We suggest that cadmium damaged cerebral sexual differentiation by its actions as an endocrine disruptor and supported by the changes discretely observed from early life during sexual development to adult life, reflected by sexual behavior. Testosterone supplementation after birth reversed some crucial parameters directly related to sexual behavior.

Eficiência da mensuração de progesterona salivar para identificar a ovulação em cadelas / Efficiency of salivary progesterone measurement to identify the ovulation in bitches

Vários autores enfatizaram a importância do monitoramento do ciclo estral em cadelas e citaram exemplos de como realizar tal procedimento. O objetivo deste estudo foiavaliar a técnica de dosagem de progesterona salivarem cadelas para identificar a ovulação nesta espécie. Para composição do grupo experimental, foram utilizadas 13 cadelas, de diferentes raças (sem raça definida, Buldogue Inglês, Bernesse Mountain Dog) e diferentes idades (11 meses a 9 anos). Amostras de sangue e saliva foram colhidas simultaneamente em todos os animais, a partir dos primeiros sinais clínicos de proestro. Amostras salivares foram obtidas com o uso de dispositivo comercial específico (Salivette®). Este método foi eficaz, visto ter tornado possível obter volume suficiente para dosagem de progesterona na grande maioria das amostras (100 μL para dosagens em duplicata). As concentrações de progesterona no soro foram determinadas pela técnica de radioimunoensaio e na saliva por enzimaimunoensaio, ambas com kits comerciais. Observou-se uma relação linear crescente e positiva entre a progesterona sérica e salivar (r=0,704; p<0,0001) em cadelas. Uma das cadelas apresentou ciclo anovulatório, no qual, durante 13 dias, as concentrações séricas de progesterona sérica se mantiveram entre 1,67 e 3,76 ng/mL e as concentrações salivares de progesterona entre 19,55 e 236,77 pg/mL. Conclui-se que as concentrações de progesterona salivarmensuradas pela técnica de enzimaimunoensaio podem ser utilizadas para avaliar a ocorrência ou ausência de ovulação em cadelas.

Several authors have emphasized the importance of monitoring estrous cycle in bitches and mentioned technique examples of how it can be done. The aim of this study was to evaluate the salivary progesterone quantification technique in order to identify ovulation in this species. To compound the experimental group, 13 bitches of different breeds (no specific breed, English Bulldog, Bernesse Mountain Dog)and different ages (from 11 months to 9 years old) were used. Blood and saliva samples were collected simultaneously in all animals, starting about the first day of proestrus clinical signs. Salivary samples were collected with a specific commercial device (Salivette®). This method was effective, since it has become possible to obtain enough volume in almost all samples to quantify salivary progesterone (100 μL for duplicate quantification). Serum progesterone was quantified by radioimmunoassay and salivary progesterone by enzyme immunoassay, both of them with commercial kits. There was an increasing, linear and positive correlation between salivary and serum progesterone (r=0.704; p<0.0001) in bitches. One of the animals had an anovulatory cycle, in which, for 13 days, seric progesterone levels were maintained between 1.67 and 3.76 ng/mL and salivary progesterone levels were maintained between 19.55 and 236.77 pg/mL. It was concluded that salivary progesterone levels measured by enzyme immunoassay is a technique that can be used to evaluate the presence or absence of ovulation in bitches.

Morfologia do sistema genital feminino da paca (Cuniculus paca, Linnaeus, 1766) / Morphology of the female genital system of the paca (Cuniculus paca, Linnaeus, 1766)

Foi caracterizada a morfologia macroscópica do genital feminino, de seis exemplares adultos de paca (Cuniculus paca), mediante dissecação das cavidades abdominal e pélvica imediatamente após o óbito. Os ovários apresentam forma ovoide, achatados dorso-ventralmente, de coloração amarela esbranquiçada com pequenos pontos avermelhados em sua superfície; têm localização sublombar, caudal aos rins; estão envoltos por uma rasa bolsa ovárica e fixados pelo mesovário; a tuba uterina é um órgão par, de aspecto sinuoso, contínua aos ovários, estando inserida na mesossalpinge e se estendendo até o início de cada corno uterino correspondente. Os cornos uterinos retilíneos fixam-se à parede abdominal pelo mesométrio e se unem pelo ligamento intercornual na altura da entrada da pelve, onde se posicionam dorsalmente à vesícula urinária; duas cevices estão presentes, embora o septo uterino que as separa seja incompleto, caracterizando presença de dois óstios uterinos internos e um único óstio uterino externo, considerando-se este útero como duplo incompleto. A vagina é um órgão tubular que se posiciona ventral ao reto e dorsal à vesícula urinária e à uretra, não se verificou a presença de vestíbulo e a vagina e a uretra não possuem ponto comum de convergência, abrindo-se, cada uma delas, diretamente na região vulvar, que se apresenta plana, com reduzidos lábios vulvares, apenas o clitóris de forma cônica é pouco proeminente e apresenta duas estruturas pontiagudas em sua região distal. Não se verificaram diferenças estatisticamente significativas nas mensurações realizadas nos ovários, tubas uterinas e cornos uterinos, ao se comparar os antímeros direito e esquerdo

The macroscopic morphology of genital tract of six adult female paca (Cuniculus paca) was studied through dissection of abdominal and pelvic cavities immediately after death. The ovaries have ovoid shape, dorsal-ventrally flattened, whitish yellow color with small red spots on its surface, located in sublombar situation, caudally to the kidneys, surrounded by a shallow bursa and fixed by the mesovarium; the oviduct is a pair of sinuous tubes, continuous with the ovaries, inserted in the mesosalpinx and extending up to the beginning of each correspondent uterine horn. The uterus horns are rectilinear and attached in the abdominal walls by the mesometrium, each horns extends caudally into the pelvic cavity and are linked by intercornual ligament, the ventral surface chiefly contacts the bladder; two cervices are present, although the uterine septum is incomplete, characterizing the presence of two internal uterine ostia and one external uterine ostium, considering this uterus as an incomplete duplex. The vagina is a tubular organ that is positioned ventrally to the rectum and dorsally to the urinary bladder and urethra; urethral duct is placed apart of the vaginal canal, characterizing the absence of the vestibulum; the vulva presents itself planed, with reduced vulvae lips, the clitoris is a conical structure with two prominent pointed structures at its distal region. There were no differences statistically significant in measurements made in the ovaries, oviducts and uterine horns, when comparing the right and left sides

Avaliação de protocolos para indução de inatividade ovariana em gatas domésticas / Evaluation of protocols for induction of inactivity ovarian in domestic cats

Os índices de prenhez após inseminação artificial em felídeos selvagens não são satisfatórios devido ao variável ambiente endócrino após a estimulação com gonadotropinas. O objetivo deste estudo consistiuem aumentar a taxa de sucesso em programas de inseminação artificial em gatas domésticas (animal modelo). As fêmeas (n=9) foram divididas em três grupos, cada um com três animais, sendo: 1) controle(C), somente 200 UI eCG/ 100 UI hCG ; 2) levonorgestrel oral (L)(0,075 mg) durante 37 dias + eCG/hCG; 3) etonogestrel (E), implante subdérmico durante 37 dias + eCG/hCG. Foram submetidas ao exame laparoscópico 29-39 horas após a administração de hCG para verificação da resposta ovariana e realização de esfregaço vaginal para monitoração da fase do ciclo estral. Foram coletadas amostras de fezes 60 dias antes e 60 dias após o tratamento com gonadotropinas para dosagem hormonal de estrógenos. Os resultados foram avaliados através do Teste ANOVA. Os níveis de significância mostraram que o Grupo E, em contraste com o Grupo C e o Grupo L, apresentou inibição satisfatória das concentrações de estrógenos durante a sua utilização. O grupo L não apresentou inibição ovariana durante o tratamento e diferença significativa em relação ao Grupo C. No exame laparoscópico todas as fêmeas dos grupos C, L e E apresentaram folículos e 77% das fêmeas apresentaram corpo lúteo. Também apresentaram células epiteliais superficiais anucleadas e nucleadas características de estro. Concluiu-se que a utilização de implantes de etonogestrel em gatas domésticas mostrou-se eficaz, possibilitando asua utilização prévia aos programas de inseminação artificial, aspiração folicular e também para a contracepção.

Reproductive success in endangered captive small felids species is veryl ow. Due to great variability in endocrine environment post gonadotropin treatment, after artificial insemination pregnancy rates are very low. Nowadays, ovarian activity controll improves the AI success in many species. In this study, new protocols were compared to improve the fertilization rates in artificial insemination programs in domestic cat. Female domestic cats were divided in three treatments: 1) control (eCG/hCG); 2) levonorgestrel (0.075 mg) orally during 37days + eCG/hCG; 3) etonogestrel subdermal implant during 37days + eCG/hCG: Laparoscopies were done 29-39 hours post hCG treatment to verify ovarian activity. Vaginal swabs were collected at laparoscopic procedures. Fecal samples were colected 60 days before, during and 60 days after the gonadotropin treatment for estradiol assay. Means comparisons were done by ANOVA test. Results demonstrated that etonogestrel (implant) and not oral levonorgestrel successfully suppressed ovarian activity. The levonorgestrel group didnot show ovarian inactivity during the administration, presenting oestradiol peaks and without significative diference comparing to control group. All females presented anuclear and nuclear superficial vaginal epithelial cells at laparoscopies. In conclusion, the etonogestrel implant used in the domestic cat was efficient and can be used previous to gonadotropin protocol in artificial insemination programs, follicular aspiration and contraception

Efeitos do estresse de trabalho sobre parâmetros seminais de cães da raça Rottweiler / Evaluation of work stress effects on Rottweilers male dog´s fertility

O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos do estresse de trabalho sobre a fertilidade de cães machos. Foram utilizados 18 cães da raça rottweiler, férteis, com idade média de 4 anos, distribuídos aleatoriamente em dois grupos: repouso (controle) e trabalho (tratamento). O tratamento era composto por 5 fases: 1-adaptação, 2-adestramento básico, 3-adestramento militar e condicionamento, 4-acampamento, 5-repouso. Durante todo o período experimental, foram feitas duas coletas de sêmen semanais, para avaliação do ejaculado. No final de cada fase foi realizada coleta de sangue para dosagem dos níveis plasmáticos de cortisol. Os dados foram analisados pelo SAS, á =5%. Observou-se efeito negativo do estresse sobre os parâmetros motilidade (72,63 vs. 57,62, p<0,0001) e vigor espermático (3,06 vs. 2,52, p<0,0001), porcentagem de defeitos maiores(16,01 vs. 26,80, p< 0,0001) e totais (29,61 vs. 40,34, p<0,0001).Observou-se interação (p<0,0001) entre tempo e tratamento sobre a variável cortisol, indicando que o tipo de agente estressante (fase) interfere no nível plasmático de cortisol. Com base nesses resultados,é possível concluir que o estresse de trabalho interferiu de maneira negativa na fertilidade dos cães.

The present work aimed to evaluate the effect of work stress male dogs fertility. Eighteen fertile male Rottweiler dogs, mean aged 4 years old, were randomly allocate into two groups: resting (control) and working (treatment). Treatment consisted of 5 working stages: 1– adaptation, 2- basic obedience training, 3 - physical conditioning and military training, 4 – camping and 5 – resting. During the experimental period, semen was collected and evaluated twice a week.At the end of each stage, blood collections were performed in order to evaluate plasmatic levels of cortisol. Data were analyzed using the statistical software SAS (a=5%). A significant negative effect of stress was observed on sperm motility (resting=72.63 vs. working=57.62,p<0.001), progressive motility (resting=3.06 vs. working=2.52, p<0.0001), major defects (resting=16.01 vs. working=26.80,p<0.0001) and total defects (resting=29.61 vs. working=40.34,p<0.0001). Furthermore, a significant interaction (P<0.0001) was observed between treatment and working stage periods for the plasmatic levels of cortisol, suggesting that the level of stress may vary according to the type of work. Results indicated that work stress may negatively influence fertility in male dogs.

Validação de conjuntos diagnósticos comerciais para dosagem sérica de progesterona e estradiol em jaguatirica (Leopardus pardalis) e gato-do-matopequeno (Leopardus tigrinus / Progesterone and estradiol commercial kits validation in serum of ocelots (Leopardus pardalis) and tigrina (Leopardus tigrinus)

Este estudo teve como objetivo validar os conjuntos diagnósticos m comerciais DPC (Coat-A-Count - Diagnostic Products Corporation/USA), em fase sólida, para dosagem de progesterona e DSL (Diagnostic System Laboratories INC/USA), em fase líquida, para dosagem de estradiol, por radioimunoensaio, em soro de Leopardus pardalis (n=5)e Leopardus tigrinus (n=4), antes (15-30 dias) e após (24-28 horas) tratamento com gonadotropinas exógenas (hCG/ Novormon® eeCG/ Vetecor®; pFSH/Folltropin-V® e pLH/Lutropin-V®). A concentração sérica para Leopardus pardalis variou 0,005 a 0,151ng/ml para estradiol e 0,15-37,22ng/ml para progesterona. A concentração sérica para Leopardus tigrinus variou 0,012-0,147ng/ml para estradiol e 0,06-34,09ng/ml para progesterona. A sensibilidade mínima detectada foi 0,004 ng/ml para progesterona e 0,00014ng/ml para estradiol. Para progesterona o coeficiente intra-ensaio baixo foi 2,58% e alto6,36%, já o coeficiente inter-ensaio baixo foi 0,67% e alto 5,55%. Para o estradiol o coeficiente intra-ensaio baixo foi 0,69% e alto 4,15%,sendo o coeficiente inter-ensaio baixo 1,40% e alto 3,00%. Paralelismo foi encontrado para progesterona e conjunto comercial DPC com r = 0,96 para Leopardus pardalis e r = 0,99 para Leopardus tigrinus. Para estradiol em conjunto comercial DSL paralelismo foi encontrado com r = 0,98 para Leopardus pardalis e com r = 0,99 para Leopardus tigrinus. Com estes resultados podemos concluir que o conjunto diagnóstico comercial DPC para dosagem de progesterona e DSL para dosagem de estradiol foram validados para utilização em soro de Leopardus pardalis e Leopardus tigrinus, podendo ser utilizado como ferramenta no manejo reprodutivo destas espécies visando à conservação.

DPC commercial kit (Coat-A-Count - Diagnostic Products Corporation/USA) and DSL commercial kit (Diagnostic System Laboratories INC/USA) were used for progesterone and estradiol radioimmunoassay validation in serum of two endangered Brazilian felids: Leopardus pardalis (n=5) and Leopardus tigrinus (n=4) before (15-30 days) and after (24-28 hours) exogenous gonadotrophins treatment(hCG/ Novormon® and eCG/ Vetecor®; pFSH/Folltropin-V® andpLH/Lutropin-V®). Variation of estradiol concentration was 0.005 -0.151 ng/ml and progesterone concentration was 0.15 - 37.22 ng/ml for Leopardus pardalis. Variation of estradiol concentration was 0.012 -0.147 ng/ml and progesterone concentration was 0.15 - 37.22 ng/ml for Leopardus tigrinus. Minimum sensibility detected for progesterone was 0.004 ng/ml and for estradiol was 0.00014 ng/ml. Progesterone intra-assay coefficient was 2.58% and 6.36% and inter-assay was 0.67% and 5.55%. Estradiol intra-assay coefficient was 0.69% and 4.15%,and inter-assay was 1.40% and 3.00%. Parallelism was used for kits validation. Progesterone and DPC commercial kit Parallelism wasr = 0.96 for Leopardus pardalis and r = 0.99 for Leopardus tigrinus. Estradiol and DSL commercial kit Parallelism was r = 0.98 for Leopardus pardalis and r = 0.99 for Leopardus tigrinus. In conclusion, these results showed that DPC commercial kit for serum progesterone dosages and DSL commercial kit for serum estradiol dosages can be used for Leopardus pardalis e Leopardus tigrinus. These findings are potentially valuable for the reproductive management and conservation of endangered felid populations.

Validação laboratorial e fisiológica de conjunto comercial para a quantificação de corticóides fecais em chimpanzé (Pan troglodytes) e orangotango (Pongo pygmaeus), cativos e submetidos a enriquecimentos ambientais / Laboratorial and physiological validation of comercial kits for quantification of fecal corticoids of captive chimpanzees (Pan troglodytes) and orangutangs (Pongo pygmaeus) under environmental enriched conditions

Neste trabalho foi realizado estudo comparativo dos níveis de corticóides fecais (CF) de chimpanzé (Pan troglodytes) e orangotango(Pongo pygmaeus). Foram analisadas amostras coletadas em duas fases distintas, relacionadas com a introdução de técnicas de enriquecimento ambiental, a saber: Base (antes da introdução) e Habituação(imediatamente após). Realizamos as validações do conjunto comercial para radioimunoensaio ImmunuChem™ Double Antibody Corticosterone da MP Biomedicals, para mensuração de CF. A validação laboratorial dos conjuntos diagnósticos para uso em extrato fecal de primatas foi realizada pelo método de paralelismo, no qual, para cada espécie, concentrações conhecidas de corticosterona foram adicionadas a um pool de extratos fecais, sendo estas amostras analisadas em seguida. As inclinações das curvas obtidas nestes ensaios e da curva padrão do ensaio foram então comparadas. Os resultados obtidos para chimpanzé e orangotango, foram respectivamente, Y=17,23+1,31*X;R...

A comparative study of fecal corticoids (FC) concentrations was carried out with chimpanzees (Pan troglodytes) e orangutans (Pongo pygmaeus). Fecal samples were collected before (Basal) and just after (Habituation)enrichment introduction and analyzed. We performed biochemical and physiological validations of the ImmunuChem™ Double Antibody Corticosterone kit for radioimmunoassay from MP Biomedicals for quantifying FC concentrations. To establish the biochemical validity of our assay we performed parallelism assays in which pooled fecal extracts from both species were spiked with known quantities of corticosterone standard and the slopes of the curves obtained with these samples and the standard curves of the kits were compared. The correlation coefficients were R

A exposição ao glifosato-roundup causa atraso no início da puberdade em ratos machos / Glyphosate-roundup exposure delays puberty onset in male rats

Os efeitos causados pelas substâncias contidas nos pesticidas e adjuvantes podem ser responsáveis por inúmeras alterações no sistema reprodutivo de machos e de fêmeas. A partir do momento que o glifosato-Roundup penetra na célula ele reduz a atividade da proteína StAR e da enzima aromatase. Este trabalho avaliou a possível correlação entre o desenvolvimento das características puberais em animais expostos diariamente ao herbicida glifosato, pela observação do crescimento e desenvolvimento e do início do período púbere. Utilizou-se 32 ratos machos divididos em 4 grupos de tratamentos (0, 5, 50 e 250 mg/kgPV), dos 23 aos 53 dias de idade. Utilizou-se análise de MANCOVA para a comparação dos pesos corporais, Kruskall-Wallis para o dia e ANOVA para o peso ao descolamento do prepúcio. Não houve interferências do tratamento sobre o crescimento dos animais em nenhum grupo. A idade à puberdade foi significativamente diferente entre os grupos 50 mg/kg e 0 mg/kg (36,6±0,5; 36 dias; p<0,05), 250 mg/kg e 0 mg/kg (37,2±0,4; 36 dias; p<0,001) e 5 mg/kg e 250 mg/kg (36,5±0,53; 36 dias; p<0,05). O peso à puberdade foi maior no grupo de 250 mg/kg em relação aos grupos de 0 mg/kg e 5 mg/kg (142,7 ± 9,3; 128,9 ± 5,4; 126,1 ± 8,8 g, respectivamente; p<0,001). O peso do grupo de 50 mg/kg (134,1 ± 9,2g) não foi diferente dos outros grupos. É provável que a exposição crônica ao herbicida glifosato-Roundup cause a disrupção endócrina no eixo hipotalâmico-hipofisário-gonadal durante a maturação sexual, pela evidenciação do atraso no início da puberdade.

The effects of herbicides and it's adjuvants can be responsible for several alterations in reproductive organs of male and female. Since glyphosate-Roundup penetrates in the cell, it reduces the activity of StAR protein and aromatase enzime. This study evaluated the development of pubertal characteristics in animals receiving oral dosages of glyphosate-Roundup by gavage, by daily body weight measurement and verification of preputial separation (PPS). 32 male rats were allocated in 4 groups of treatments (0, 5, 50 e 250 mg/kg) from 23 to 53 days of age. The body weight from 23 to 53 days was compared using analysis of MANCOVA, Kruskall-Wallis was used to compare the day at PPS and ANOVA was used to compare the body weight at PPS. Age at PPS was different between groups 50 mg/kg and 0 mg/kg (36,6±0,5; 36 days; p<0,05), 250 mg/kg and 0 mg/kg (37,2±0,4; 36 days; p<0,001) and 5 mg/kg and 250 mg/kg (36,5±0,5; 36 days; p<0,05). The body weight at PPS was higher in group of 250 mg/kg n comparison to groups of 0 mg/kg and 5 mg/kg (142,7 ± 9,3; 128,9 ± 5,4; 126,1 ± 8,8 g, respectively; p<0,001). The body weight of group 50 mg/kg (134,1 ± 9,2g) wasn't differ from another groups. Probably, the daily exposure to glyphosate-Roundup causes endocrine disruption in hypothalamic-pituitary-gonad axis during sexual maturation, because it delayed the onset of puberty.

Comparação de método para análise de metabólitos fecais de glicocorticóides em jaguatiricas (Leopardus pardalis) submetidas a tratamento hormonal e vídeo-laparoscopia / Comparison of methods fecal glucocorticoids metabolite analyses in ocelots (Leopardus pardalis) submited to hormonal treatment and video-laparoscopy

Dois metódos de extração de metabólitos fecais 32,33 e dois conjuntos comerciais (“ImmuChem Doubly Antibody Corticosterone 125I RIA”-ICN Biomedicals e “Coat-a-count Cortisol 125I RIE” - DPC) foram utilizados na mensuração dos metabólitos de glicocorticóides (cortisole corticosterona) em amostras de fezes de jaguatiricas (Leopardus pardalis) (n=3), antes e após tratamento hormonal e procedimentos de vídeo-laparoscopia. O objetivo desse estudo foi comparar e validar fisiologicamente os diferentes protocolos de extração e diferentes conjuntos comerciais na mensuração hormonal. Não houve diferença significativa com relação ao método de extração dos metabólitos. O conjunto comercial ICN Biomedicals provou ser melhor na detecção de metabólitos fecais de glicocorticóides em jaguatiricas.

The objective of this study was to compare two different fecal metabolites extraction protocols 32,33 and two commercial kits used to analyse fecal glucocorticoids (cortisol and corticosterone) in ocelots (Leopardus pardalis) submitted to hormonal treatment and video-laparoscopy procedure. Based on hormonal analyses, both extraction protocols exhibited similar performance. One commercial kit (ICN Biomedicals) had better results than another (DPC) on glucocorticoids metabolites evaluation.

Controle da síntese de prostaglandina F2 ALFA no endométrio bovino in vitro / In vitro control of prostaglandin F2a synthesis in bovine endometrium

A síntese de prostaglandina F2alfa(PGF2 alfa) endometrial, resulta de uma complexa cascata de eventos intracelulares que ocorrem de maneiraaltamente coordenada. A síntese de PGF2 alfa pode ser estimulada napresença da melitina e do forbol 12,13 dibutirato (PDBu). O objetivo do presente estudo foi verificar se a produção basal e a estimulação aguda de PGF2 alfa são dependentes da síntese de proteínas. No experimento 1, explantes obtidos de fêmeas bovinas (n=2), cíclicas, não lactantes, no dia 15 do ciclo estral foram incubados em quadruplicata, com meio de cultivo (KHB) ou KHB suplementado com PDBu 10(elevado a -6)M, melitina 10(elevado a -6)M ou melitina 10(elevado a-5)M. Amostras do meio foram coletadas 0 e 60 minutos após os tratamentos e as concentrações de PGF2 alfa foram mensuradas por radioimunoensaio. Com 60 minutos após os tratamentos houve aumento das concentrações médias de PGF2 alfa(P<0,06) em resposta ao tratamento com PDBu comparado ao grupo KHB e melitina. No experimento2, explantes endometriais de fêmeas bovinas (n=4), não gestantes,no 17° dia do ciclo estral, pesando de 80 a 100mg foram incubados em KHB suplementado com 0, 50, 100 ou 200mg/mL de CHX e 0 ou 100ng/mL de PDBu em um arranjo fatorial 2 x 4, em quadruplicata. Amostras do meio foram coletadas 0 e 60 minutos após os tratamentos e as concentrações de PGF2 alfa foram mensuradas por radioimunoensaio. A integridade dos explantes endometriais tratados com CHX foi avaliada por cortes histológicos. Foi observado aumento na produção de PGF2 alfa em resposta ao tratamento com PDBu(P<0,01), entretanto, não houve diferenças na produção de PGF2 alfa pelos tecidos tratados com diferentes concentrações de CHX, associadas ou não ao PDBu. A integridade histológica dos explantes foi preservada. Conclui-se que a produção basal e a estimulação aguda da síntese de PGF2 alfa não são dependentes da síntese de novas proteínas.

Synthesis of endometrial prostaglandin F2 a (PGF2 a) results from acomplex cascade of highly coordinated intracellular events. Production of PGF2 a can be stimulated by mellitin and 12, 13 phorbol dibutyrate(PDBu). Objective of the present study was to verify whether basal or stimulated synthesis of PGF2 a was dependent on de novo protein synthesis. In Experiment 1, endometrial explants from cyclic, non-lactating cross-bred beef cows (n=2) on day 15 of the estrous cycle were incubated in quadruplicate in culture KHB culture medium or medium supplemented with 10(involution-6)M PDBu, 10(involution-6)M melittin or 10(involution-5)M melittin. Medium samples were collected immediately and 60 minutes after treatment administration and concentration of PGF2 a in medium were measured by radioimmunoassay. Concentrations of PGF2a in medium were higher (P<0.06) after treatment with PDBu in comparison with control and melittin. In Experiment 2, endometrial explants from cyclic, non-lactating cross-bred beef cows (n=4) on day17 of the estrous cycle were incubated in quadruplicate in medium supplemented with 0, 50, 100 or 200mg cyclohexamide (CHX) and 0or 100ng/ml PDBu, in a 4 x 2 factorial arrangement. Medium sampleswere collected immediately and 60 minutes after administration of treatments and concentrations of PGF2 a measured by radioimmunoassay. Endometrial integrity was was evaluated by histology. Treatment with PDBu stimulated production of PGF2 a(P<0.01), regardless of concentration of CHX used. The CHX did not affect production of PGF2 a, either in the presence or absence of PDBu. Histological integrity of explants was preserved. It was concluded that both basal and PDBu-stimulated PGF2 a productionare not dependent on new protein sythesis.

Determinação do sexo de psitacídeos por radioimunoensaio (RIE) de esteróides sexuais a partir de excretas cloacais / Psittacine sex determination by radioimunoassay (RIA) of sex steroids using fecal samples

Para o presente estudo utilizaram-se amostras de excretas cloacais de 50 aves da família Psittacidae, previamente sexadas. Os andrógenos e estrógenos fecais foram extraídos com Tampão Fosfato Salino (PBS) e com uma solução PBS:Álcool Etilico (4:1) e a mensuração hormonal foi realizada em "kits" comerciais para radioimunoensaio no Laboratório de Dosagens Hormonais (LDH) do Departamento de Reprodução Animal (VRA) da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ) da Universidade de São Paulo (USP). O sexo de cada ave foi confirmado utilizando como parâmetro o intervalo de confiança (95%) da média dos valores transformados dos índices do fator testosterona e seus metabólitos. Setenta por cento das aves tiveram o sexo confirmado pela técnica do radioimunoensaio. Os resultados encontrados demonstram a necessidade da realização de mais estudos para a determinação do sexo de aves monomórficas por meio de técnicas não invasivas.

For the current study, it were used fecal samples from 50 psittacines, previously sexed by PCR from blood cells. The fecal androgens and estrogens metabolites were extracted with PBS (Phosfate Buffer Saline) or PBS:Ethil Alchool (4:1) and measured by comercial radioimunoassay kits at the "Laboratório de Dosagens Hormonais" of the "Departamento de Reprodução Animal" of the "Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia" of the "Universidade de São Paulo". The sex determination of the birds were performed using the confidence interval (95%) for transformed androgens values. 70% of birds had the sex confirmed by radioimunoassay. The results showed that further studies for sex determination on monomorphic birds by non-invasive techniques are necessary.

Estudo da correlação das características citológicas vaginais e os níveis séricos de estradiol e progesterona em leão africano (Panthera leo) mantidos em cativeiro / Vaginal citology, serum estradiol and progesterone: a correlation study on captive African lions (Panthera leo)

Foram estudados 11 exemplares de fêmeas adultas de leões africanos (Panthera leo) mantidas na Fundação Parque Zoológico de São Paulo (FPZSP) quanto às características da citologia vaginal, níveis hormonais (estradiol e progesterona) e suas correlações. As características celulares vaginais encontradas nas leoas foram semelhantes às descritas para os felinos domésticos. Adotando-se os padrões hormonais de estradiol (E2) e progesterona (P4) que definem as fases do ciclo estral de felinos domésticos, foi possível caracterizar três fases do ciclo ovariano nas leoas: Diestro, Estro e Interestro. O nível médio de E2 sérico encontrado na fase caracterizada como Estro (23,33 + / - 2,92 pg/ ml;, apresentou-se mais alto do que nas outras fases estudadas e o nível médio de P4 sérico encontrado na fase de Diestro (20,12 + / - 17,55 ng/ ml; apresentou diferença estatística significativa em comparação às outras fases estudadas. Demonstrou-se também, a existência de correlação de intensidade média entre os níveis séricos de P4 e o número de células superficiais corneificadas (r= - 0,603 e p = 0,0496) e entre P4 e células intermediárias (r = 0,637 e p = 0,0350). Também foi demonstrada a existência de correlação negativa de forte intensidade entre os números de células superficiais corneificadas e o de células intermediárias. (r = -0,979 e p < 0,0001). Concluímos que a correlação entre as características celulares vaginais e os níveis séricos de progesterona e estradiol permitiram-nos determinar três diferentes fases do ciclo ovariano da fêmea de leão africano.

Eleven captive adult female African lions (Panthera feo) at the Fundação Parque Zoológico de São Paulo were blood sampled in order to assess the serum hormone levels (estradiol and progesterone) and their correlation with the vaginal citology. The morphological and stainning characteristics of vaginal cells were similar to those described for domestic cats. Based on hormonal proflles of estradiol and progesterone described for domestic cats, three different phases for the ovarian cycle of the lionesses were clearly described: diestrus, estrus and interestrus. The mean serum estradiol concentrations in the estrus (23,33 + / - 2,92 pg/ ml) were significantly higher than in diestrus and interestrus. The mean serum progesterone values in diestrus (20,12 + / - 17,55 ng/ml) were significantly higher than in estrus and interestrus. There were correlations between progesterone values and the number of superficial cornifled vaginal cells (r = - 0,603 and p = 0,0496) and between progesterone and intermediate cells (r = 0,637 and p = 0,0350). There were also a strong negative correlation between the number of superficial cornified vaginal cells and intermediate cells (r= -0,979 e p < 0,0001). It concluded that the correlations between vaginal cells and the serum estradiol and progesterone levels allowed us to identify three different phases of the ovarian cycle in female African lion.

Quantificação de esteróides fecais de fêmeas de onça-pintada (Panthera onca) mantidas em cativeiro: validação da técnica / Fecal steroid and quantification in captive jaguars (Panthera onca): validation of a method

Foi estudada a atividade ovariana de fêmeas de onça-pintada (Panthera onca; adultas n=2 e pré-púberes n=3) mantidas em cativeiro, pela extração e quantificação de estrógenos e progestinas fecais. Foram colhidas amostras fecais de 2-7 vezes por semana durante 16-18 meses. Foi realizada a validação dos radioimunoensaios em fase sólida, para progesterona e 17beta-estradiol, para uso em extratos fecais em onça-pintada. A concentração média de estrógenos fecais (ng/g de fezes secas) para o grupo dos animais pré-púberes foi de 10,97 (variando de 0,28 a 59,16) e para o grupo dos animais adultos foi de 68,99 (variando de 3,50 a 609,37). A concentração média de progestinas fecais (müg/ g de fezes secas) para o grupo dos animais pré-púberes foi de 0,26 (variando de 0,02 a 4,44) e para o grupo dos animais adultos foi de 0,85 (variando de 0,08 a 6,51).

Analysis of some normal parameters of the spermiogram of captive capuchin monkeys (Cebus apella Linnaeus, 1758 )

Nine adult males of capuchin monkey (Cebus apella) were electro-ejaculated with a rectal bipolar probe under general anaesthesia with tiletamine -zolazepan association. From the obtained ejaculate, we only analysed the liquid fraction in order to avoid any kind of chemical treatment to attain dissolution of the seminal coagulum. The mean obtained volume was 0,2ml with the sperm concentration of 56.169 x 10(6) sperm/ml and mean motility 68,4 percent and vigor 2,6. The mean percentage of morphologic normal spermatozoa was 39 percent. The technique was efficient for semen collection in Cebus apella and allowed seminal evaluation without possible sperm lesions caused by chemical treatment for coagulum dissolution

Pelvimetria e pelvilogia em búfalas mestiças (Bubalus bubalis) / Pelvimetry and pelvilogy in female mixed buffaloes (Bubalus bubalis)

Mensuraçöes pélvicas internas e externas foram realizadas in vivo em 255 búfalas mestiças. Para a pelvimetria interna, utilizou-se o pelvímetro de Menissier-Vissac. Os resultados foram confrontados com a idade, perímetro torácico, peso, altura e comprimento. Para comparaçäo das medidas pélvicas, os animais foram divididos equitativamente em 3 grupos (n=85), segundo a ocorrência e freqüência de partos (nulíparas, primíparas e multíparas). Os diâmetros pélvicos internos: biilíacos superior e inferior (horizontais) e sacropúbico (vertical) apresentaram respectivamente as seguintes médias e desvios padröes: 17,1 ± 2,17 cm; 15,7 ± 2,11 cm e 22,3 ± 2,51 cm; e os externos: biilíaco, biisquiático e ilioisquiático, da mesma maneira: 59,8 ± 6,13 cm; 32,4 ± 3,56 cm e 44,5 ± 3,31 cm. Correlaçöes positivas significantes (p < 0,01) foram verificadas entre todas as medidas, porém, dentre as medidas corpóreas gerais, o perímetro torácico revelou o mais alto índice de correlaçöes com as medidas pélvicas internas e externas. Diferenças significativas (p < 0,05) entre os 3 grupos foram observadas em relaçäo à pelvimetria interna, quando comparados através das médias ajustadas em funçäo do perímetro torácico, porém em relaçäo à pelvimetria externa somente entre as nulíparas e os demais grupos para os diâmetros biilíaco e ilioisquiático. Para o diâmetro biisquiático externo nenhum dos grupos revelou tais diferenças. A pelvimetria interna em relaçäo à externa mostrou-se menos correlacionada com o desenvolvimento corpóreo e mais nitidamente influenciada pela ocorrência dos sucessivos partos

Sincronizaçäo de estro e dinâmica folicular de éguas Crioulas submetidas a tratamentos com norgestomet, acetato de melengestrol e altrenogest / Estrus synchronization and follicular dynamics of Crioulo mares by norgestomet, melengestrol acetate and altrenogest treatments

21 éguas da raça Crioula em idade reprodutiva foram divididas em 3 grupos (I, II e III) de 7 animais; animais do grupo I receberam injeçäo intramuscular única de 3 mg de norgestomet e 5 mg de valerato de estradiol e implante subcutâneo de norgestomet na tábua do pescoço por 9 dias; animais do grupo II receberam injeçäo intramuscular única de 5 mg de estradiol 17-beta e 0,5 mg de acetato de melengestrol via oral/animal durante 9 dias; éguas do grupo III receberam 0,045 mg/kg PV de altrenogest via oral por 9 dias. A suspensäo do tratamento com progestágenos, todas as éguas dos 3 grupos receberam dose luteolítica de luprosteol e 3.000 UI de hCG quando seus folículos dominantes apresentaram características pré-ovulatórias detectadas ultra-sonograficamente. Todas as éguas foram submetidas à avaliaçäo ultra-sonográfica diária objetivando-se a análise retrospectiva do maior folículo e do segundo maior folículo, sendo cobertas próximo ao momento da ovulaçäo por garanhöes andrologicamente testados. Näo houve supressäo do desenvolvimento folicular para o grupo II (MGA). O maior grau de sincronizaçäo observado nos grupos I e III foi, respectivamente, de 85,71 por cento e 66,70 por cento no 5º dia após a administraçäo do luprosteol (p > 0,05). A porcentagem de supressäo de manifestaçäo de estro nos grupos I e III foi, respectivamente, de 85,71 por cento e 100 por cento (p > 0,05), com porcentagem de respostas em estro pós PG de 85,71 por cento para o grupo I e 85,71 por cento para o grupo III (p > 0,05). As taxas de prenhez observadas foram de 100 por cento (I) e 85,71 por cento (III) (p > 0,05). Os resultados foram baseados no número de éguas que responderam à sincronizaçäo. Os intervalos PGF2alfa-estro, PGF2alfa7-hCG, hCG-ovulaçäo e PGF2alfa-ovulaçäo para os grupos I e III foram de 4,5 ± 0,80 e 4,2 ± 0,8 (p > 0,05), 8,0 ± 1,41 e 6,17 ± 0,6 (p > 0,05), 1,5 ± 0,22 e 2,28 ± 0,28 (p > 0,05) e 9,8 ± 1,02 e 8,6 ± 1,32 dias (p > 0,05) respectivamente. Os resultados indicam a comprovaçäo da eficiência dos sistemas de sincronizaçäo de estros com implante de norgestomet e administraçäo oral de altrenogest, havendo tendência de maior grau de sincronizaçäo para o sistema norgestomet, sem diferenças significativas no tocante aos índices reprodutivos e dados de dinâmica folicular, com exceçäo do menor diâmetro dos folículos dominantes observados e da ocorrência de apenas uma onda folicular maior para ciclos suprimidos pelo regime progestágeno-estradiol

Post partum reproductive assessment in lowland Tapir (Tapirus terrestris): a case report

The lowland tapir is the biggest Brazilian terrestrial mammal, which belongs to the order Perissodactyla, suborder Hippomorpha, superfamily Tapiroidea and a member of the family Tapiridae. At tropical forest the tapir is involved with seed dispersal. The knowledge of this wild animal reproductive cycle is one way to help its preservation. The stress due to restrain of captive or free-ranging wild animal in order to sample collection limits endocrine study once it can be hazard for the estrous cycle. One possibility is to quantify gonadal hormones at the excreta. Progesterone milk levels were studied in a tapir housed at the Araçatuba Zoo, in Säo Paulo, Brazil. Milk samples, vaginal cytology and rectal temperature were collected during lactation. The progesterone was quantified by radioimmunoassay solid phase (Coat-a-Count, DPC®). The standard was supplied by CENA-FAO and the assay showed sensitivity of 1.25 nmol/L with intra-assay variation of 15.36 percent. During most of the lactation (November to June) the female showed no detectable levels of progesterone. After 158 days (from November to April) it was detected the first progesterone peak with 2.3 nmol/L that lasted for 5 days. The second progesterone peak of 3.54 nmol/L lasted for 23 days. The lactation ceased 74 days after the first milk progesterone surge. This animal showed a prolonged lactational anestrous period (nearly 5 months) and the return of gonadal cycle by fall suggested no positive photo-period influence. The milk progesterone quantification showed to be useful for reproductive cycle evaluation of this animal, although vaginal cytology and temperature fluctuation had no relationship with hormonal levels